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　　酶免反應顯色淡、靈敏度偏低的原因及解決方案

　　一、主要原因分析

　　標本問題?

　　目標蛋白濃度過低?：標本中待測物質(zhì)濃度低于檢測下限，導致抗原-抗體結合不足?。

　　干擾物質(zhì)存在?：如高濃度脂質(zhì)、血紅蛋白、類風濕因子或防腐劑(如疊氮鈉)抑制反應?。

　　試劑與操作問題?

　　抗體效價不足?：一抗/二抗保存不當(反復凍融、過期)或稀釋比例不匹配?。

　　孵育條件不當?：溫度或時間未達標(如37℃孵育不足30分鐘)?。

　　洗滌不凈：殘留未結合抗體或干擾物，或洗液配制錯誤(如濃縮洗液未按比例稀釋)?。

　　儀器與參數(shù)問題?

　　酶標儀濾光片設置錯誤?：波長選擇不當(如TMB底物應選450nm)?。

　　顯色時間不足?：TMB底物孵育時間過短(建議15分鐘以上)?。

　　二、針對性解決方案

　　優(yōu)化標本處理?

　　低濃度標本可通過超濾離心濃縮?。

　　添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本以減少基質(zhì)干擾?。

　　驗證試劑與操作?

　　檢查抗體效價，重新滴定工作濃度(如抗體套裝，效價≥1:5000)?。

　　嚴格控溫控時(37℃振蕩孵育)，避免酶標板干燥?。

　　規(guī)范儀器使用?

　　校準酶標儀波長(如TMB底物450nm)?。

　　延長顯色時間(TMB孵育15分鐘)并避光操作?。

　　三、擴展閱讀

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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